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文章摘要

仿生偽裝技術利用天然細胞膜作為藥物載體，在藥物動力學和生物相容性方面均優(yōu)于合成材料，是一種很有發(fā)展前景的安全納米藥物。然而，目前為止科學界僅有少數(shù)研究者致力于設計這種仿生偽裝技術，使其具有一些附加或優(yōu)化后的特性——特別是對藥物傳遞系統(tǒng)“智能化”至關重要的特性，如刺激響應性藥物釋放。本文描述了一種pH響應的仿生“血小板”，用于腫瘤特異性藥物傳遞和腫瘤觸發(fā)性藥物釋放。這種血小板納米載體將血小板膜與功能化合成脂質(zhì)體結合，由于其以血小板膜為基礎，因此表現(xiàn)出較高的腫瘤親和力，并能根據(jù)溶酶體室的酸性微環(huán)境選擇性釋放其載物。在小鼠腫瘤模型中，它顯示出明顯優(yōu)于無pH響應的血小板或基于傳統(tǒng)pH敏感性脂質(zhì)體的納米制劑的抗腫瘤效果。本文介紹了一種將刺激響應特性融入仿生納米顆粒的簡便方法，展示了工程細胞膜作為仿生偽裝物用于新一代生物相容、高效納米載體的潛力。

實驗思路

實驗背景

血小板膜包裹的納米顆粒具有血液循環(huán)中的隱蔽性和生物友好性，以及顯著有效的腫瘤靶向性。據(jù)推測，后者是源于血小板和腫瘤細胞之間的強烈親和力，這種親和力是由一系列分子相互作用介導的，例如血小板CD62p與腫瘤細胞表面過度表達的CD44受體的特異性結合。此外，CD62p還是血小板膜表面蛋白成分中大量存在且常用的一個標志物。

實驗名稱

Western blot 分析血小板膜標志物CD62p

實驗目的

檢驗脂質(zhì)體擠出器共擠出的方法是否成功將血小板膜整合到PEOz-platesome-Dox納米顆粒上，納米顆粒與血小板膜上的蛋白質(zhì)分布是否存在差異。

實驗方法

①收集處理各組的血小板膜蛋白樣品進行聚丙烯酰胺凝膠電泳；

②進行凝膠上蛋白樣品的轉(zhuǎn)膜；對膜蛋白樣品進行封閉，一抗（兔抗鼠CD62p）孵育和二抗（羊抗兔IgG-HRP）孵育，清洗；

③最后用觸摸成像系統(tǒng)進行曝光鑒定和拍照。

研究結果

實驗結果

如下圖所示，利用Bioss產(chǎn)品——Anti-CD62p進行孵育，可以清晰地看到在不同納米制劑組都存在CD62p的蛋白條帶，信號明顯且單一。

實驗結論

Western blot實驗證明了我們成功將血小板膜Platelet與酸響應脂質(zhì)體PEOz-liposome 通過共擠出整合到了一起。CD62p抗體在驗證PEOz-platesome成功合成中發(fā)揮著非常重要的鑒定作用。PEOz-platesome的成功制備為我們后續(xù)的體外細胞實驗和體內(nèi)抗腫瘤實驗打下了基礎。

總結

對于給定類型的細胞膜，可轉(zhuǎn)移到偽裝納米材料上的生物功能是有限的，并且許多特性對于藥物載體特別理想，例如特定靶向性、刺激反應性和藥物控制釋放，通常不會轉(zhuǎn)移到未經(jīng)修飾的細胞膜涂層上。到目前為止，大多數(shù)具有工程功能的仿生納米系統(tǒng)都是通過在預先設計好的納米顆粒核上進行偽裝來構建的。而本研究通過把細胞膜涂層功能化，將pH敏感的脂質(zhì)DSPE-PEOz結合到血小板中，以加速抗癌藥物阿霉素 (dox)在酸性環(huán)境中的釋放。同時，通過水合作用將阿霉素包裹在顆粒內(nèi)。這種構建藥物載體的方式，在保留其仿生特性的同時，又賦予其額外的功能，未來在生物醫(yī)學應用領域也會有無限潛能。