一、檢測服務內(nèi)容
二、服務流程
客戶提交流式細胞檢測請求與實驗要求，與公司商定具體的實驗項目、數(shù)量和費用，雙方簽訂《委托流式細胞檢測服務合同書》；
客戶提供檢測樣品，我公司按照協(xié)定要求安排檢測項目預實驗，雙方根據(jù)預實驗結(jié)果商定實驗技術(shù)參數(shù)細節(jié)；
公司實驗室正式開展檢測實驗，在規(guī)定時間內(nèi)向客戶提交實驗數(shù)據(jù)和檢測報告。
三、樣品要求
客戶提供信息：1.提供抗體貨號及廠家 2.細胞信息 3.實驗方案及具體要求
樣品寄送須知：細胞常溫, 生長良好，無污染，細胞數(shù)量＞106個；組織離體后制成單細胞懸液，加入PBS/培養(yǎng)基內(nèi)4℃運輸；血液采集在EDTA/肝素鈉的采血管內(nèi)混勻，4℃運輸。
四、交付標準
上機原始數(shù)據(jù)，高清散點圖直方圖密度圖等數(shù)據(jù)分析圖片，詳細檢測報告。
更多詳情請見官網(wǎng)：rvdoil.com
實驗數(shù)據(jù)分享
細胞抗原鑒定
實驗原理：根據(jù)抗原-抗體反應原理，檢測細胞表面或者胞內(nèi)抗原，對于同一樣品檢測不同種抗原，可以分為單標、雙標以及多標。實驗流程：離心去上清-調(diào)整細胞密度-固定穿膜-加入標記抗體-孵育-離心去上清-重懸細胞-上機檢測。實驗結(jié)果展示：
單染直方圖
單染散點圖
雙染散點圖
細胞凋亡檢測
實驗原理：Annexin V選擇性結(jié)合磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)，是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。在正常細胞中， PS只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。使用帶有綠色熒光FITC標記的Annexin V，即Annexin V-FITC，則可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡直接檢測到PS外翻這一細胞凋亡的重要特征。此方法被公認為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。實驗流程：細胞培養(yǎng)-轉(zhuǎn)染或藥物處理-細胞收集- Annexin V-FITC/PI標記-上機檢測。實驗結(jié)果展示：
左下象限LL為活細胞；右下象限LR為早期凋亡細胞；右上象限UR為晚期凋亡細胞；左上象限UL為碎片及壞死細胞。
Annexin V-FITC（綠色）染色細胞為早期凋亡細胞；PI（紅色）染色細胞為壞死細胞；Annexin V-FITC/PI雙染細胞為晚凋或壞死細胞
細胞周期檢測
實驗原理：碘化丙啶(Propidium，簡稱PI)是一種雙鏈DNA 的熒光染料，PI和雙鏈DNA 結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA 的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA 被PI染色后，可使用流式細胞儀對細胞進行DNA 含量測定，然后根據(jù)DNA 含量的分布情況進行細胞周期分析。實驗流程：細胞培養(yǎng)-轉(zhuǎn)染或藥物處理-細胞收集-細胞周期試劑盒-上機檢測。實驗結(jié)果展示：
細胞周期擬合圖
線粒體膜電位檢測-JC-1
實驗原理：線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。JC-1是一種理想的用于檢測線粒體膜電位的熒光探針，可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。其原理是，當線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中，形成聚合物，488nm激發(fā)時的最大發(fā)射波長為590nm，可以產(chǎn)生紅色熒光，在流式上表現(xiàn)為FL1和FL2雙陽性;當線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體基質(zhì)中，此時JC-1為單體，488nm激發(fā)時最大發(fā)射波長為527nm，可以產(chǎn)生綠色熒光，形成流式圖匯總所有細胞FL1為陽性。凋亡細胞則大多為FL1單陽性。不同熒光顏色的轉(zhuǎn)變反應線粒體膜電位的變化，常用紅綠熒光的相對比例衡量線粒體去極化的比例。實驗流程：細胞離心去上清-調(diào)整細胞密度-裝載探針-孵育探針-上機檢測。
