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免疫組化問(wèn)題解答
1、染色過(guò)強(qiáng)？
原 因
解決方法
抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過(guò)夜
孵育溫度過(guò)高超過(guò)37度
一般在室溫20-28度
DAB顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高
顯色時(shí)間不超過(guò)5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)
2、非特異性背景染色？
原 因
解決方法
操作過(guò)程中沖洗不充分
每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷
可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長(zhǎng)
組織中含內(nèi)原性生物素
正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
血清蛋白封閉不充分
血清蛋白封閉不充分
3、染色弱？
原 因
解決方法
抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短
提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少于60分鐘
試劑超過(guò)有效使用時(shí)間
應(yīng)更換試劑
操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干
每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 （應(yīng)防止切片干燥）
室溫太低，低于15度
要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過(guò)夜
蛋白封閉過(guò)度
封閉不要超過(guò)12分鐘
4、染色陰性？
原 因
解決方法
操作步驟錯(cuò)誤
應(yīng)重試，設(shè)陽(yáng)性對(duì)照
組織中無(wú)抗原
設(shè)陽(yáng)性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤
仔細(xì)確定一抗二抗種屬無(wú)誤
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